贾居贞,字仲明,真定获鹿人。十五岁那年,蒙古军攻破汴京,居贞奉母亲居于天平。刚二十岁就任行台从事。当时,国家法制未立,人们以贿赂相交结。有人送他黄金五十两,居贞拒绝了,太宗闻知十分嘉奖,令有关衙门每月给他白金百两,以表彰其廉洁。世祖在即位前就知居贞贤能,召入王府,使他监筑上都城。竣工后,他因母亲去世,辞官归家。

世祖即位,中统元年(1260),授居贞中书左右司郎中。世祖北征,居贞随从,给世祖讲述《资治通鉴》。有天,世祖问他“:郎中薪俸若干?”居贞如数回答,世祖认为太薄,令增加,居贞辞谢道“:官秩应该如此,不可因臣而乱了制度。”刘秉忠奏荐居贞为参知政事,他辞谢说:“以后必有由郎官而按例求为执政官的,那时将如何对待?”至元元年(1264),参议中书省事,诏令他与左丞姚枢巡视河东、山西。五年,再为中书郎中。这时正当阿合马专权,忌妒他,改为给事中。同丞相史天泽等纂修国史。

至元十一年,丞相伯颜伐宋,居贞以宣抚使之职参议行省事务。大军渡江后,攻克鄂、汉,伯颜继续率军东下,留右丞阿里海牙与居贞分别镇守。居贞建议说“:江陵系要地,为宋朝门户,以重兵防守。听说宋军诸将不和,外来之民满城,疾病流行,缺薪柴,而又不敢外出打柴。若不乘此时机先取江陵,等到春水上涨,恐为宋军乘机顺流而下,那时鄂州危急了。”迅速将此意见上报朝廷,朝廷命阿里海牙领兵攻取江陵,居贞因要负责行省事务而留于鄂州。居贞在鄂州开仓赈济流民,宋室子孙流寓鄂州者,供饮食,不改变他们原来的服饰,通行宋朝的纸币。东南一些尚未攻下的州郡,其商人旅客留在鄂州的,发给运销货物凭证便于他们回去。免征商税,开放湖禁,造船一百数十艘,用水军驾驶,不惊扰百姓,百姓安居乐业。

娄安邦以信阳献降,居贞遣人送他入京朝见皇帝,而安邦偏将陈思聪杀了娄安邦的全家。居贞用计把思聪召来,列举其罪状,处以死刑。

宋幼主投降后,其丞相陈宜中挟益王赵曰正、卫王赵籨逃往闽、广,到处发动百姓反抗,百姓也争相响应。蕲州司空山的人民及鄂州属县县民傅高起兵响应。居贞发布檄文,说明祸福,使反抗者人心涣散,再派兵镇压,平息反抗。傅高改名换姓逃走,终被逮捕处死。高傅被捕之前,郑万户提出:“鄂州大姓都与傅高相通,请求先除掉他们以绝祸根。”居贞说“:高一鼠子,无知无识,不久就会逮捕处死,与这些大姓有何关系,我能保证无事。”郑领兵外出时,还叮嘱所留部将,等他回来时,杀尽城中大姓。因郑万户战败淹死,他的杀大姓计划才未实现就被揭发出来。

至元十四年,拜湖北宣慰使,命未下而骄将悍卒合谋扰害百姓,居贞出任视事,百姓才有恃无恐。离开鄂州时,老幼含泪送别,刻其像于石,供奉于官学内膜拜。

至元十五年,调任江西行省参知政事,还未到,百姓就千里来迎,诉其困苦。因为当时官府逮捕了一些收到宋益王、卫王传单的人,牵连入狱的大户就有三百余家。居贞到任后,把他们全都释放,将宋“二王”的传单烧毁。有一些士卒带武器入民家而诬陷别人私藏武器,借以诈取钱财,取人子女为奴为妾,居贞将他们绳之以法。大水毁坏了百姓房屋,居贞开仓赈济。南安李梓发作乱,居贞怕将帅出兵扰民,亲率领千人扎营于城北,遣人去讲明祸福。李梓发的部下闻居贞至,都走散,不肯为梓发效力,梓发及其妻子自焚。这次平乱,居贞未杀一人。杜万一在都昌反叛,居贞调兵擒获,有人上书列举巨室姓名数百人,说他们与杜万一有勾结。居贞说:“元凶已诛,牵连其他人干什么!”把那上告的文书烧毁。

至元十七年,朝廷要再征日本,造战舰于江南。居贞认为人民已极其贫困,再征日本必酿成大乱,正准备入朝谏止其事,尚未启程而病逝,终年六十三岁。赠推忠辅义功臣、银青荣禄大夫、中书平章政事,追封定国公。